传统表型鉴定

微生物传统表型鉴定方法

本文关键词:细菌鉴定、菌种鉴定、微生物检测、微生物鉴定、API试纸条、VITEK鉴定、biolog鉴定、生理生化、表型鉴定、血清学鉴定


微生物传统表型鉴定方法主要根据微生物的形态特征和理化特性来区分不同微生物间的差异。形态特征包括:显微形态和培养特征;理化特性包括:营养类型、碳氮源利用能力、各种代谢反应、酶反应和血清学反应等。

微生物传统表型鉴定是一种经典的微生物分类鉴定方法,以微生物的形态和习性等表型为主要指标,通过比较微生物的菌落形态、理化特征和特征化学成分与典型微生物的差异进行鉴别。(表1)

表1 微生物分类中的形态特征和理化特性
分类 形态特征和理化特性
培养物 菌落形态、菌落颜色、形状、大小和产色素
形态学 细胞形态、细胞大小、细胞形状、鞭毛类型、内容物、革兰染色、芽孢和抗酸染色、孢子形成模式
生理学 氧气耐受性、pH值范围、最适温度和范围、耐盐性
生化反应 碳源的利用、碳水化合物的氧化或发酵、酶的模式
抑制性 胆盐耐受性、抗生素敏感性、染料耐受性
血清学 凝集反应、荧光抗体
化学分类 脂肪酸构成、微生物毒素、全细胞组分
生态学 微生物来源

目前微生物传统鉴定方法的有:

1、API微生物系统鉴定

API 微生物鉴定系统以微生物生化理论为基础,根据微生物对所属类群选择适当的生理生化鉴定系列,包括分析各种生理条件(温度、pH、氧气、渗透压)、生化指标(唯一碳氮源、抗生素、酶、盐碱性)代谢反应析,并将结果转化成软件可以识别的数据,进行聚类分析,与已知的参比菌株数据库进行比较,最终对未知菌进行鉴定的一种技术。

2、VITEK全自动微生物鉴定

VITEK对细菌的鉴定是以每种细菌的微量生化反应为基础,不同种类的VITEK试卡(检测卡)含有多种的生化反应孔。将待检菌的纯菌落制成符合一定浊度要求的菌悬液,经充填机将菌悬液注入试卡内,封口后放入读数器/恒温培养箱,根据试卡各生化反应孔中的生长变化情况,由读数器按光学扫描原理,定时测定各生化介质中指示剂的显色(或浊度反应,然后把读出信息输入电脑储存并进行分析,再和预定的阈值进行比较,判定反应,再通过数值编码技术与数据库中反应文件进行比较,最后得到鉴定报告。

3、BIOLOG碳源自动分析鉴定

BIOLOG鉴定系统以微生物对不同碳源的利用情况为基础,检测微生物的特征指纹图谱,建立与微生物种类相对应的数据库。通过软件将待测微生物与数据库参比,得出鉴定结果。

4、Sherlock全自动细菌系统鉴定

采用Sherlock全自动细菌鉴定系统,通过对不同菌株的短链脂肪酸的种类和含量,绘制成脂肪酸图谱进行分析,并与标准数据库进行比对,来鉴定细菌及酵母。

微生物传统表型鉴定已广泛应用于药品微生物实验室。根据微生物表型鉴定所提供的信息可以判断药品中污染的微生物种类,也可掌握环境微生物菌群的变化,并进行产品的风险评估。在许多质量控制调查中,单独的表型鉴定结果就能给出充足的信息帮助调查人员进行深入调查,并按需要制定适宜的纠正措施。但是,微生物传统表型鉴定仍有很多不足,如:

1、微生物细胞的大小和形态、芽孢、细胞成分、表面抗原、生化反应和对抗菌剂的敏感性等表型的表达,除受其遗传基因的控制外,还与微生物的分离环境、培养基和生长条件等因素有关。

2、微生物表型鉴定通常需要先取得大量的纯培养物,而微生物的恢复、增殖和鉴定易受培养时间影响,事实上许多环境微生物在普通的微生物增殖培养基中是无法培养得到的。

3、一些从初始培养物中刚分离出的受损微生物还可能不能完整的表达其表型属性。因此,在表型鉴定时应注意采用的培养基、培养时间和传代次数对鉴定结果的影响。

4、传统表型鉴定的结果需要鉴定人员进行判断,易受到经验等主观因素的影响。

5、微生物在不同生长时期可能会表现出截然不然的表型特征,因此,即便是同一种菌如果在不同生长时期进行鉴定,鉴定结果也可能不同。

6、通过表型鉴定进行溯源调查时,溯源调查的准确性完全依赖于表型鉴定所得到的种属信息,一旦无法得到准确的种属信息,溯源就无法进行下去。